V diferenciálnej diagnostike mnohých chorôb využívame imunohistochemické vyšetrenie. Jeho objektivizácia je možná pomocou automatizovaných imunohistochemických systémov, ktoré sú založené na digitalizácii a spracovaní imunohistochemického preparátu v počítači.
HistoFAXS je mikroskopický systém, ktorý automaticky vykonáva kvantitatívnu analýzu imuhistochemických rezov tkaniva kombináciou vysoko rozlišovacej optiky a dvoch softwarových modulov – histoFAXS (modul slúžiaci na získanie a prenos dát z imunohistochemických rezov) a histoQuest (modul na analýzu dát).
Metódou HistoFAXS sme hodnotili zastúpenie pamäťových lymfocytov (CD45+R0+) v tkanive tonzíl u detí s recidivujúcou tonzilitídou na posúdenie imunitného stavu in situ (TissueGnostics GmbH, Viedeň, Rakúsko) (obr. 1). Prvým krokom je manuálna kalibrácia – výber imunohistochemického farbenia (obr. 2, 3) spolu s ohraničením regiónu, ktorý budeme ďalej hodnotiť (gating) (obr. 4, 5). Obrazový analyzátor je následne schopný na základe zadania imunohistochemického farbenia kvantifikovať príslušnú pozitivitu (obr. 6, 7). Zoskenovanie rezu umožní vytvorenie bodov TMA (tissue micro array dots), ktoré zodpovedajú príslušným bunkám v tkanive a bodom v scattergrame. Každá bunka má vlastné identifikačné údaje.
Vyhodnotenie umožňujú operácie Forward Gating – ohraničenie individuálnych buniek v tkanivovom reze, ktoré sa zobrazujú v podobe bodov v scattergrame a tiež Backward Gating – priradenie individuálnych bodov v scattergrame ku korešpondujúcim bunkám v tkanivovom reze. Výsledkom je štatistické spracovanie percentuálneho zastúpenia pozitívnych buniek, ich strednej farebnej intenzity a hustoty (obr. 8).
Automatizované imunohistochemické vyšetrenie sa vzhľadom na finančnú a časovú náročnosť zatiaľ využíva iba pre vedecké účely. V budúcnosti sa očakáva jeho klinické využitie v diagnostike nádorových chorôb (1). Môže tiež prispieť k exaktnejšiemu hodnoteniu typu a gradingu onkologickej choroby (2).
Literatúra
- MARKIEWICZ, T., WISNIEWSKI, P., OSOWSKI, S., KOZLOWSKI, W., KOKTYSZ R.: Comparative analysis of methods for accurate recognition of cells through nuclei staining of Ki-67 in neuroblastoma and estrogen/progesterone status staining in breast cancer. Ann Quan Cytol Histo, 31, 2009, č. 1, s. 49-62.
- SANDERS, H., STOKES, T.H., MOFFITT, R.A., CHAUDRY, Q., PARRY, R., WANG, M.D.: Development of an automatic quantification method for cancer tissue microarray study. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc, 2009, s. 3665-3668.
HistoFAXS: Automatic system for assessment of immunohistochemical sections
Jana Šemberová
(Z Oddelenia klinickej imunológie a alergológie DFNsP Bratislava, primár MUDr. M. Jančár)
